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一个好的ATCC细胞株有多方面要求

原载自:[技术资料频道]  2018-05-26  浏览次数:448

  一个好的ATCC细胞株有多方面要求:
  1. 产量高,高的产量直接降低固定投资和单次生产成本。
  2. 产品质量符合要求。产品质量影响药效和安全性。
  3. 稳定性。产量和质量在生产传代过程中不应有大的改变。一般认为在60-90PDL产量变化不超过30%是可以接受的。
  4. 与生产过程的相容性。细胞株需要适合大规模生产放大。
  5. 合规。ATCC细胞株的构建过程应避免接触或使用动物来源成分或其它可能影响安全性的成分, 保证单克隆性(clonality)以及整个过程的实验记录完整。
  ATCC细胞株无菌操作注意事项
  1.操作前要洗手,进入超净台后手要用75%酒精或0.2%新洁尔灭擦试。试剂等瓶口也要擦试。
  2.点燃酒精灯,操作在火焰附近进行,耐热物品要经常在火焰上烧灼,金属器械烧灼时间不能太长,以免退火,并冷却后才能夹取组织,吸取过营养液的用具不能再烧灼,以免烧焦形成碳膜。
  3.操作动作要准确敏捷,但又不能太快,以防空气流动,增加污染机会。
  4.不能用手触已消毒器皿的工作部分,工作台面上用品要布局合理。
  5.瓶子开口后要尽量保持45℃斜位。
  6.吸溶液的吸管等不能混用。
  ATCC细胞株的细胞处理:
  1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养隔夜(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养隔夜)。第二天换液并检查细胞密度。
  2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
  对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
  方法一:收集细胞,1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
  方法二:可选择半数换液方式,弃去半数培养基后,将剩余细胞悬起,将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
  3)ATCC细胞株的细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。悬浮细胞冻存时,应将细胞收集,1000RPM条件下离心5分钟,少量保存上清液(防止细胞吸走),加入部分新鲜培养基,加入到冻存管中,在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。

 

 

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