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ATCC细胞株稳定整合试验中的几个关键因素

原载自:[技术资料频道]  2018-12-25  浏览次数:558

  ATCC细胞株是通过选择法或克隆形成法从原代培养物或细胞系中获得具有特殊性质或标志物的培养物,也就是说,ATCC细胞株是用单细胞分离培养或通过筛选的方法,由单细胞增殖形成的细胞群。细胞株的特殊性质或标志必须在整个培养期间始终存在。
  ATCC细胞株无菌操作注意事项:
  1.操作前要洗手,进入超净台后手要用75%酒精或0.2%新洁尔灭擦试。试剂等瓶口也要擦试。
  2.点燃酒精灯,操作在火焰附近进行,耐热物品要经常在火焰上烧灼,金属器械烧灼时间不能太长,以免退火,并冷却后才能夹取组织,吸取过营养液的用具不能再烧灼,以免烧焦形成碳膜。
  3.操作动作要准确敏捷,但又不能太快,以防空气流动,增加污染机会。
  4.不能用手触已消毒器皿的工作部分,工作台面上用品要布局合理。
  5.瓶子开口后要尽量保持45℃斜位。
  6.吸溶液的吸管等不能混用。
  ATCC细胞株稳定整合试验中的几个关键因素:
  1),外源插入片段的拷贝数。多数情况下,低拷贝甚至是单拷贝可以减少人为实验因素的干扰。
  2),整合的几率,这不仅决定了稳定株筛选的难易程度,而且还可以帮助人们更容易得到混合稳定株。
  3),整合位点的转录活跃度,决定了稳定株中外源片段的表达质量。理想的状况是单拷贝,但转录活性比较高。
  4),整合后的稳定性。不同的整合位点决定了外源片段在染色体中的稳定性,有些区域易发生重组或者丢失,从而导致稳定株再次丢失的情况。
  5),使用混合稳定株或者获得多个不同单克隆稳定株。因为稳定整合往往伴随这插入失活宿主内源基因,所以实验时通过使用混合稳定株,或者对多个单克隆稳定株进行比较,可以帮助研究人员获得更的实验数据。
  冻存的ATCC细胞株和杂交腐细胞株在运送过程中使用干冰保持低温。收到细胞后,可以立即解冻复苏,去除二甲基亚砜(DSMO0)后进行细胞培养。如果不立即复苏培养细胞,必须将细胞冻存管放置于液氮罐气相层储存。请不要将细胞存储在-130℃以上的温度。如果温度不够低,达不到-130℃,细胞活力会立即下降。
  ATCC细胞株产品附带一份产品资料单,其中包含细胞株的信息和详细的操作指南。细胞株的所有详细介绍可以在ATCC找到 ,产品资料单也可以在ATCC下载。此外产品还附带细胞株具体生产批次的检测报告,其中包含批次的特定信息,如每只冻存管中细胞的数量,无微生物污染的检测结果等。

 

 

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