幸运飞艇

加入收藏 | 设为首页 | 联系我们

产品搜索

联系我们

联系人:蒋经理
电话:86-25-86880024
手机:18066071954
地址:南京市建邺区云锦路58号
Email: sales@cobioer.com

技术文章 / article
当前位置:首页 > 技术文章 > 对ATCC细胞培养时的试剂有何要求?

对ATCC细胞培养时的试剂有何要求?

原载自:[技术资料频道]  2019-03-18  浏览次数:97

   对ATCC细胞培养时的试剂有何要求?
  ATCC细胞在培养瓶长成致密单层后,已基本上饱和,为使细胞能继续生长,同时也将细胞数量扩大,就必须进行传代(再培养)。传代培养也是一种将细胞种保存下去的方法。同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。悬浮型细胞直接分瓶就可以,而贴壁细胞需经消化后才能分瓶。
  ATCC细胞的培养试剂分析:
  一、纺锤体阻断剂
  在有丝分裂过程中,随着纺锤丝的形成,染色体被牵引到一起难以观察其形态。纺锤体的形成在于细胞质和纺锤体成分的粘度之间的平衡,因此,改变细胞质的粘度,即可破坏纺锤体形成,从而使得染色体均匀散开,且染色体缢痕区更为清楚。
  在培养中使用的纺锤体阻断剂为秋水仙素,在终止培养前加入适量秋水仙素,使正在分裂的细胞停留在中期,以获得大量分裂相供分析之用。秋水仙素的浓度范围比较宽,一般使用浓度0.05-0.8微克/毫升,在终止培养前处理2-4小时。但在实际工作中需要借助浓度和处理时间来控制染色体的收缩程度。秋水仙素作用时间越长,被阻断的中期分裂相越多,但是染色体也越凝聚和收缩,所以还视各实验室经验而定。
  二、ATCC细胞低渗液
  低渗液是指渗透压和离子强度均低于正常细胞生理条件的溶液,如水、低渗的柠檬酸钠或氯化钠、甘油磷酸钾(0.65M)、KCl(0.075M)等。低渗效果取决于低渗液的化学组成、低渗的温度和处理时间。低渗处理是凭借反渗透作用使细胞膨胀染色体铺展,同时可使粘附于染色体的核仁物质散开,以便能在一个平面上观察所有染色体形态。实验室中一般选用0.075MKCl为低渗液(具体情况取决于实际操作,鉴于实验的连续性和稳定性,本实验室采用0.35%KCl),其优点有:
  1.染色体轮廓清楚,可染色性强,染色时间短。
  2.用于显带染色时能充分显示带型特点。低渗处理为37℃,15-25分钟,以预实验条件为准。
  三、固定液
  固定液的重要特性是能迅速穿透细胞,将其固定并维持染色体结构的完整性,还要能够增强染色体的嗜碱性,达到优良染色效果。单纯的固定液一般难以达到这些要求,因此在实验中使用两种混和的固定液。
  Carnoy固定液(甲醇:冰乙酸=3:l)每次使用前需临时配制,长时间放置影响固定效果,固定时间15分钟至24小时,冰箱、室温均可。必要时可改变甲醇和冰乙酸的比例,冰乙酸比例增加,利于细胞膨胀、染色体铺展,但易导致细胞破裂、染色体散失。
  四、滴片
  滴片使细胞悬液从一定高处落在载玻片上,淋巴母细胞膜破裂,染色体分散开。载玻片可用冰片和干片,效果均好。滴片后需空气干燥。
  五、Giemsa染色
  Giemsa染料不是一种单一染料,而是天青、伊红、甘油和甲醇的混合物,配制后原液储存。在常规染色中,并不比其他染料优越,但在显带技术中,却是无可比拟的。
  Giemsa工作液在使用前临时配制,浓度可在2.5-10%之间(原液2份加pH7.4磷酸缓冲液10-40份)。染色后,染色质呈红色,细胞核是蓝色。

 

 

电话:
025-86880024
手机:
18066071954
17768108080

化工仪器网

中级会员

中级会员

5

推荐收藏该企业网站
友情链接:万喜彩票  万家彩票网  中福彩票网  中福彩票官网  万家彩票官网  万家彩票网  盛通彩票  
扫一扫访问手机站扫一扫访问手机站
访问手机站

免责声明: 本站资料及图片来源互联网文章,本网不承担任何由内容信息所引起的争议和法律责任。所有作品版权归原创作者所有,与本站立场无关,如用户分享不慎侵犯了您的权益,请联系我们告知,我们将做删除处理!