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ATCC细胞如何培养?

YUANZAIZI:jaguntold.com[JISHUZILIAOPINDAO]  2016-07-20  LIULANCISHU:1121

基本原理

 细胞培养(Cell culture)是模拟机体内生理条件,将细胞从机体中取出,在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代,进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。近年来,广泛地应用于分子生物学、遗传学、免疫学、肿瘤学、细胞工程等领域,发展成一种重要生物技术,并取得显著成就。由体内直接取出组织或细胞进行培养叫原代培养

 体外培养的原代细胞或细胞株要在体外持续地培养就必须传代,以便获得稳定的细胞株或得到大量的同种细胞,并维持细胞种的延续。培养的细胞形成单层汇合以后,由于密度过大生存空间不足而引起营养枯竭,将培养的细胞分散,从容器中取出,以1:2或l:3以上的比率转移到另外的容器中进行培养,即为传代培养

试剂和设备

体彩排列5号码遗漏  XIBAOXUANFUYE; 

  6KONGPINGDIZUZHIPEIYANGBAN,HUOφ60 mmPEIYANGMIN; 

  18mm x 18mm HUO20mm x 20mmJINYU75%YICHUNZHONGDEGAIBOPIAN; 

  HANXUEQINGPEIYANGJI(TONGCHANGWEI RMPI 1640,HAN10% XIAONIUXUEQING,100U/mlQINGMEISU,100μg/mlLIANMEISU); 

  CHAOJINGGONGZUOTAI; 

  CO2FUXIANG; 

  GAIPIANNIE;

操作步骤

  1.体彩排列5号码遗漏用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布; 

  2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片); 

  3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时; 

  4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片完全浸在培养液中; 

  5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。

注意事项

  1.本方法适用于贴壁细胞培养,而不适用于悬浮细胞培养,悬浮细胞可使用滴片法; 

  2.所使用的盖玻片应该为玻璃制造,并经过铬酸洗液处理; 

  3.体彩排列5号码遗漏盖玻片非常薄,易碎,取放盖玻片时动作要轻; 

  4.如果需要更多生长状态一致的细胞,可以使用较大的培养皿,但不宜过大,以避免培养液的浪费和增加污染机率; 

  5.如果细胞贴壁生长能力较差,可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。

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