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人结肠癌细胞株前期需要准备

原载自:[行情动态]  2018-05-10  浏览次数:513

  人结肠癌细胞株的复苏,遵守慢冻快融的原则。先将水浴锅调至37-37.5度,取出冻存的细胞迅速放入后将细胞面浸至水面以下不断摇动至融化。在无菌台内将完全培养基加入50ml的小培养瓶内,约5ml左右,然后用无菌吸管从冻存管内取出细胞,置培养并内轻轻摇晃,使细胞均匀后置培养箱内培养。
  人结肠癌细胞株前期需要准备:
  1.构建好的外源基因载体
  2.待转染的细胞系(1×106个细胞,可传代,倍增时间小于48小时)以及细胞培养条件的说明
  3.若需要检测靶基因的表达变化,请提供相应抗体
  收到人结肠癌细胞株后,取出培养瓶在倒置显微镜下观察细胞生长情况。
  (一)如果细胞未长满,用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内,严格无菌操作,打开细胞培养瓶,吸出培养液,仅留下10ml培养液在瓶内继续培养。
  (二)如果细胞已长满,即可进行传代培养。具体步骤如下:
  1. 弃去培养液,用PBS(不含钙,镁离子)洗1-2次。
  2. 加1ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,倒转放于37度培养箱1-3分钟预热,然后又将培养瓶倒转大约30秒后,在倒置显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆分散,轻敲几下培养培养瓶,细胞随即脱落下来。
  3. 加入6-8ml完全培养基,吸出,分到新的培养瓶中。一传二。
  人结肠癌细胞株实验要点及说明:
  1.本方法适用于贴壁细胞培养,而不适用于悬浮细胞培养,悬浮细胞可使用滴片法;
  2.所使用的盖玻片应该为优质玻璃制造,并经过铬酸洗液处理;
  3.盖玻片非常薄,易碎,取放盖玻片时动作要轻;
  4.如果需要更多生长状态一致的细胞,可以使用较大的培养皿,但不宜过大,以避免培养液的浪费和增加污染机率;
  5.如果细胞贴壁生长能力较差,可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。

 

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