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ATCC细胞的复苏事项可要看好了!

原载自:[行情动态]  2019-03-07  浏览次数:70

   ATCC细胞的复苏事项可要看好了!
  ATCC细胞复苏的原则:
  在实际操作中,冻存细胞要进行复苏,再培养传代。复苏细胞一般采用快速融化法。以保证细胞外结晶快速融化,以避免慢速融化水分渗入细胞内,再次形成胞内结晶损伤细胞。
  ATCC细胞的复苏事项:
  1.仔细阅读细胞说明书,了解细胞相关信息,如细胞形态、所用培养基、血清比例,配置相应的完全培养基,确保细胞培养条件与说明书一致。若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题,应自行承担。每株细胞2支冻存管复苏时建议先只复苏一支,若首次复苏出现问题请及时与厂家取得联系。
  2.取出冻存管,浸入37温水浴中,并不时摇动令其尽快融化,注意管口不要没入水面以下,以免造成污染。
  3.从37水浴中取出冻存管,用75%酒精擦拭冻存管表面,放入超净台内。吸出细胞悬液,转移至培养瓶内,补加6-8mL培养液,37温箱静置培养,隔天换新鲜培养液,以去除DMSO,或者复苏当时离心去除DMSO,并在显微镜下观察细胞状态和密度;对于贴壁展开较慢的细胞,建议复苏当时去除DMSO,待细胞贴壁展开后再换液(原代细胞:细胞悬液离心后观察管底沉淀初步判断细胞量,后行台盼蓝染色以确定细胞存活率;接种后隔天观察细胞贴壁量,以判定细胞贴壁率)。
  4.贴壁细胞
  过夜培养后多数细胞会重新贴壁,待汇合度80%左右时正常传代。若细胞仍不能贴壁,请用台盼蓝染色法鉴定细胞活力。如台盼蓝染色证实细胞活力正常则1000rpm离心3-5min收集细胞,用新鲜培养基重悬后移回培养瓶内重新贴壁培养。
  5.悬浮细胞
  过夜培养后多数细胞会逐渐恢复活力,有光泽、饱满。若细胞光泽暗淡,用台盼蓝染色法鉴定细胞活力。
  6.建议在收到细胞后每天各拍几张细胞照片,记录细胞状态,便于菌种的查询。

 

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